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食品中抗病毒類藥物殘留檢測方法研究進展

病毒感染是威脅人類及動物生命健康的主要問題。為解決流感問題,人們研發了多種抗病毒類藥物,起初這些藥物研發僅用于解決人類流感問題,然而多次流感事件也造成大量畜禽死亡,帶來嚴重的經濟損失。因此,養殖戶便將抗病毒類藥物摻入飼料中對禽畜進行喂養。然而,將人類藥物移植獸用,不僅沒有準確的科學依據,并且長期使用會造成動物中毒、藥物殘留、病毒抑制或變異等,進而影響人類的身體健康。但由于抗病毒類藥物價格低廉、效果顯著,因此仍被養殖戶大量使用,然而所造成的副作用也越來越大。動物食品中抗病毒類藥物的殘留已成為公眾廣泛關注的問題。

來自中國肉類食品綜合研究中心的張穎穎和李瑩瑩對目前的抗病毒類藥物殘留檢測方法進行簡要概述,以期為抗病毒類藥物殘留檢測提供一定的理論依據。

1. 酶聯免疫吸附測定法

酶聯免疫吸附測定(ELISA)具有選擇性強、靈敏度高、檢出限低等特點,是當前快速檢測的主要方法之一ELISA試劑盒檢測限為0.25 μg/kg,回收率為82.5%~91.0%。該方法操作簡便、快速、靈敏度高,可以用于日常動物源性樣品的快速檢測;雙抗體夾心(DAS)-ELISA法,用于測定豬α-干擾素的含量。此方法不受其他基質的干擾,準確性高。

食品中抗病毒類藥物殘留檢測方法研究進展

2.色譜法

氣相色譜法

氣相色譜(GC)不適于直接分析沸點高及熱穩定性差的化合物。而大多數抗病毒類藥物沸點高,且易溶于水,因此在樣品前處理過程中需用有機試劑來提取待測物,并進行衍生化,才能進入GC進行檢測,整個操作過程相對繁瑣、易引入雜質、重現性相對較差,因此在抗病毒藥物殘留檢測方面應用較少。Farajzadeh等創建了測定金剛烷胺的GC法,該方法溶劑使用量相對少、檢出限低。樓永軍等設置了合適的程序升溫過程,用質量選擇檢測器(MSD)測定金剛烷、溴代金剛烷、金剛烷胺及副產物金剛烷醇的電子轟擊(EI)譜圖,用于結構確認;利用FID檢測器進行定量測定,其檢出限為2 ng。

氣相色譜-質譜法

GC-質譜(MS)法同GC法一致,樣品需進行衍生化,操作過程繁瑣,因此GC-MS法測定抗病毒類藥物的報道相對較少。Herold等創建了毛細管GC-MS法,用于測定血漿中的金剛乙胺含量,經選擇離子監測模式進行儀器掃描測定。

液相色譜法

液相色譜(LC)分析過程不受樣品揮發性和熱穩定性的限制。目前,測定抗病毒類藥物的LC法中主要采用2種檢測器,即紫外檢測器(UVD)與熒光檢測器(FLD),然而大部分抗病毒類藥物無較強的紫外吸收和熒光吸收,因此在樣品前處理過程中也會進行衍生化操作。Jing Shaojun等創建了測定金剛烷胺的高效液相色譜-熒光檢測法,檢出限為0.1 ng/mL。Cui Shuangjin等以9,10-蒽醌-2-磺酰氯(ASC級)作為衍生化試劑,并通過實驗驗證所生成的衍生物能夠長期穩定存在;過量的衍生化試劑會與流動相中的甲醇進行反應,生成甲基氫醌-2-磺酰酯,其保留時間與待分析化合物的衍生物的保留時間不同,因此不會影響金剛烷胺、金剛乙胺及美金剛的分析鑒定,最終其檢出限為20 ng/mL。

液相色譜串聯質譜法

目前,80%以上的抗病毒藥物殘留檢測方法均是液相色譜串聯質譜(LC-MS/MS)法,其具有分離效果好、靈敏度高、檢出限低、回收率高、重現性好等優點。LC-MS/MS可用于測定各種基質樣品,通過多重反應監測掃描模式可減少基質干擾、提高準確性、避免假陽性和假陰性現象。

毛細管電泳法

毛細管電泳是具有分析速度快、分辨率高、穩定性好、消耗溶劑少等優點,可以作為LC的替代或互補技術。但由于其重現性差,使得分析結果的可靠性降低。Reichová等創建了用于測定金剛烷胺、金剛乙胺、美金剛殘留量的毛細管電泳方法。Laborde-Kummer等用毛細管電泳法測定了市售膠囊中奧司他韋的含量,該方法具有選擇性高、準確度高、分析時間短等優點,檢出限與定量限分別為0.97 ?g/mL與3.24 ?g/mL。

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3.光譜法

分光光度法

分光光度法具有應用廣泛、選擇性好、靈敏度高、分析成本低等優點。Rizk等提出用紫外分光光度計定量測定含有伯胺基團的藥物——鹽酸金剛烷胺、苯環丙胺硫酸鹽和氨甲環酸,該方法的回收率分別為(99.68±0.92)%、(100.3±0.75)%、(99.8±0.76)%;Raut等過紫外分光光度計準確測定奧司他韋的含量,該方法操作簡便、靈敏度高,檢測限為0.342 ?g/mL;Mustafa等測定阿昔洛韋的含量,回收率分別為99.32%和98.77%;此外金剛烷胺在pH 3.0的條件下可與3價鐵形成絡合物,在295 nm波長處測定其吸光度可用于準確定量。

近紅外光譜技術

近紅外光譜(NIR)具有快速、操作簡單、樣品少、不消耗化學試劑、不污染環境等優點。Dou Ying等利用NIR鑒別金剛烷胺,并創建人工神經網絡模型進行定量,通過不斷優化參數設定,最終該方法可以準確測定金剛烷胺的含量;Titova等也建立了NIR法用于測定金剛烷胺的含量。然而創建近紅外方法過程中需采用大量有代表性的樣品進行建模,并且該模型需要根據測定的樣品不斷地進行維護改進,無形中增加了工作量;若參比方法精度不夠,NIR測定的結果也會產生偏差。因此目前NIR方法在食品安全檢測方面還未得到廣泛應用。

電化學傳感器檢測法

電化學傳感器是操作簡便、反應迅速、測定準確,可用于日常監督檢測中。Salem等基于修飾碳糊和石墨涂層的離子選擇性電極制備電化學傳感器,用于測定藥物及人尿樣中的金剛烷胺和嗎啉胍的質量濃度,該電極制備簡單、使用方便,并且成本低,可以用于實際樣品中金剛烷胺和嗎啉胍的含量測定;此外Jalali等用β-環糊精修飾的碳電極測定藥物中金剛烷胺的含量,該法反應靈敏、操作簡便。

芯片法

芯片法操作快速簡便,可進行高通量測定,是未來快速、高通量檢測方法的研究熱點之一。蔡自由等首次提出通過微流控芯片來測定片劑中的金剛烷胺含量。該方法消除了電極污染,降低了背景噪音,提高了檢測靈敏度、穩定性和重復性。

“速成雞”事件以來,抗病毒類藥物的濫用再次引起了廣泛關注,進而針對食品中抗病毒類藥物殘留檢測方法的研究再次成為熱點,其中應用最廣的便是 LC-MS/MS法,該方法操作簡便、靈敏度高、準確性好,是當前食品檢測行業的主流方法,然而該方法在檢測過程中需要大型精密儀器且檢測費用昂貴,不適合執法部門的市場監督及企業的內部自檢,因此需要創建更簡便快速、高通量的檢測方法,例如ELISA試劑盒、高通量芯片、傳感器等,這些或許會成為將來分析檢測發展的主要方向之一。



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