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什么是微流控PCR芯片

基因(遺傳因子)是產生一條多肽鏈或功能RNA所需的全部核苷酸序列。基因支持著生命的基本構造和性能。儲存著生命的種族、血型、孕育、生長、凋亡等過程的全部信息。PCR技術是基因研究的重要手段之一,但傳統PCR技術存在反應時間長、能量消耗大、不便于集成與攜帶等缺陷,微流控技術與PCR結合可以有效縮小反應體系,提高反應效率,且易于集成化與微型化。

本文采用【圖解】的方式,講解微流控PCR芯片的分類,原理以及應用。幫助大家了解認識微流控PCR芯片技術,并在各自研究領域應用微流控PCR技術。

什么是PCR

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聚合酶鏈式反應(英文:Polymerase chain reaction,縮寫:PCR),是一種分子生物學技術,用于擴增特定的DNA片段,這種方法可在生物體外進行,不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。PCR過程包括3個步驟: 變性、退火、延伸,需要在高低中3個不同的溫度(高溫變性:90℃~95℃,低溫退火:55℃~60℃;中溫延伸:70℃~72℃)下進行。

微流控PCR芯片

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Kopp設計的世界上第一款微流控PCR裝置

微流控PCR芯片,是基于微流控技術的PCR反應裝置。微流控裝置體積小巧,樣本需求小,成本低,利于現場實時檢測;并且具有小的熱質,低的熱慣性和快速的熱傳遞,以及巨大的比表面積,可以顯著提高擴增速度。同時,具有高度集成性,全封閉性,可以減少手工操作,有效避免樣本污染。

微流控PCR芯片分類

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空間型:流體在微通道運動,溫度區域固定

時間型:流體在微通道不動,通道內溫度變化

LAMP芯片: 恒溫擴增,擴增過程無需溫度變化

數字PCR:核酸分子絕對定量技術。將樣品稀釋到單分子水平,并平均分配到幾十至幾萬個單元中進行反應,在擴增結束后對每個反應單元的熒光信號進行采集,最后通過直接計數或泊松分布公式計算得到樣品的原始濃度或含量。

微流控PCR空間型-蛇形式

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采用三塊銅片作為加熱器的蛇形微流控PCR芯片

微流控PCR空間型-輻射式

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一種由太陽能驅動的便攜式PCR裝置,采用輻射式圓盤作為PCR芯片,圓盤的徑向三個區域溫度不同。擴增數據無線傳輸到平板電腦進行分析。

微流控PCR空間型-螺旋式

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Park 等將一條長3.5m的彈性石英管在有3個溫區的圓柱加熱器上螺旋式纏繞33周,實現了PCR擴增。其中a為變性區,b為退火區,c為延伸區,d為絕熱區。

微流控PCR空間型-振蕩式

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微流體通道內的振蕩液滴示意圖。樣品液滴在三個不同的加熱器之間振蕩移動,用于變性(a),退火(b)和延伸(c),第二個PCR循環(d-f)

微流控PCR空間型-閉環式

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Sun 團隊將多個閉環通道合并在一塊芯片內,利用中心的磁鐵同時對四重閉環內的磁性流體進行操縱,磁性流體繼而推動反應液在環內流動,循環通過 3 個溫區。

微流控PCR時間型-集成式

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Manage等制作的集成式微流控PCR芯片,可以對全血樣本檢測處理。與PCR腔室相鄰的是微流控閥,可以泵送流體。擴增完成后,該裝置可以使用毛細管電泳分離PCR產物。

微流控PCR時間型-離心式

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左圖為存儲試劑的微流控盤片(GeneSlice)和右圖兼容轉子架(Rotor),可以容納四個微流控盤片運行。GeneSlice包括樣品預擴增室,用于轉移預擴增產物的毛細管虹吸閥,用于樣品等分結構室,等分結構將多余的液體引導到廢物室,用于壓力均衡的通氣孔膜覆蓋。所有需要的試劑都以凍干或風干形式預先儲存。

微流控LAMP芯片

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Fang等采用PDMS和玻璃制成的微流控LAMP芯片,用于多種基因分析。該芯片由10個微腔體,以及相互連接的微通道構成。

微流控數字PCR芯片

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Song等設計的具有蛇形通道的數字PCR芯片,該芯片包括反應室和分支通道。a,第一步樣品(紅色染料)流過真空的PDMS裝置;b,反應室充滿樣品;c,試用油流過微通道;d,將樣品分成單個體積。形成的獨立的腔室,經過擴增后,通過數字處理方式,對擴增結果進行分析。

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