近來有客戶打過來說自己細胞培養(yǎng)箱里面的細胞全部都死掉了，問什么原因。小心培養(yǎng)的細胞就這樣死掉了，是個很心痛的事情。其實影響細胞存活率的原因有很多，有時候并不是細胞培養(yǎng)箱本身出了問題，我們的許多操作對細胞培養(yǎng)的結(jié)果也是有很大影響的，今天蘇州汶顥的小編就為大家分享一下對細胞進行培養(yǎng)時應(yīng)該注意的問題。

1. 確保所有實驗室材料都無菌

交叉污染是細胞培養(yǎng)的大敵。即使是輕微的污染，也可能毀了幾個星期的成果。因細胞培養(yǎng)箱內(nèi)溫暖潮濕，真菌極易生長，因此必須注意定期清潔。此外，在將培養(yǎng)瓶、移液管及其他的相關(guān)物品放入超凈臺之前，應(yīng)用酒精擦拭干凈，以避免污染。

2. 小心處理您的培養(yǎng)物

細胞培養(yǎng)的脆弱性怎么強調(diào)也不為過。劇烈搖晃，或連續(xù)的溫度波動可能會對生長產(chǎn)生不利的影響。確保培養(yǎng)箱是水平的，溫度均一，且遠離電動儀器。此外，盡量避免一次處理多個細胞系，因為它可能會影響細胞的基因型和表型。您還應(yīng)定期完成 STR 圖譜分析，以確認細胞系的身份。

3. 在使用前正確解凍細胞

盡管解凍看起來是個簡單的步驟，但必須操作得當(dāng)，以免傷害細胞。長時間暴露在高溫條件下會使細胞無法鋪板。因此，凍存管應(yīng)當(dāng)在 37°C 水浴中放置 2 分鐘，然后用條件培養(yǎng)基稀釋，以避免 DMSO 造成直接傷害。

4. 使用對數(shù)生長期的細胞

細胞培養(yǎng)過程共有 3 個階段：停滯期、對數(shù)期和平臺期，分別代表了低細胞生長、高細胞生長和無細胞生長。zui有活力的細胞是健康的，快速分裂的，在對數(shù)期以 70-80% 的匯合度存在。

5. 在傳代之前不要讓細胞完全匯合

匯合度是指貼壁細胞占據(jù)培養(yǎng)瓶表面積的比例。完全匯合意味著 100% 的表面都被貼壁細胞覆蓋。一定要避免這種狀態(tài)，因為它意味著細胞不能繼續(xù)生長。不過，當(dāng)務(wù)之急是使用活躍生長的細胞。

6. 選擇zui佳的培養(yǎng)基開發(fā)策略

在細胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基是控制產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)量和成本的zui重要因素。必須針對每種培養(yǎng)物來定制培養(yǎng)基，以優(yōu)化實驗結(jié)果。在決定以哪種方式來開發(fā)您的培養(yǎng)基時，您有幾個選擇。您可以購買現(xiàn)成的，自己開發(fā)，也可以與另一家公司合作開發(fā)特定的培養(yǎng)基。在這個過程中，您需要考慮時間和成本等因素。

7. 配制干粉培養(yǎng)基時評估水的質(zhì)量

液體培養(yǎng)基往往會帶來比干粉培養(yǎng)基更高質(zhì)量的結(jié)果。這可能與水的質(zhì)量有關(guān)。由于細菌在水中迅速生長，故需要監(jiān)控內(nèi)毒素及其他污染物。商業(yè)公司有資源來監(jiān)控和控制細菌生長，比如過濾器。因此使用商業(yè)化生產(chǎn)的液體培養(yǎng)基會更加可靠一點。

8. 利用細胞的代謝特性來優(yōu)化培養(yǎng)基

分析使用過的培養(yǎng)基，有助于鑒定必要成分的代謝速率，包括氨基酸和維生素。從細胞生長階段和蛋白生產(chǎn)階段收集到的動態(tài)代謝圖譜可用來平衡基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加培養(yǎng)基，指導(dǎo)培養(yǎng)基的重點，有助于蛋白質(zhì)的生產(chǎn)。

9. 避免細胞的過度消化

胰蛋白酶通過消化負責(zé)讓細胞與容器結(jié)合的蛋白質(zhì)，而實現(xiàn)貼壁細胞的傳代。如果細胞暴露在胰酶中時間太長，則胰酶將開始切割細胞表面蛋白，這會影響細胞行駛正常功能的能力。

10. 培養(yǎng)基中不要一直使用抗生素

隨著細胞培養(yǎng)物更加頻繁地暴露在抗生素中，對抗生素有著天然耐藥性的菌株將開始出現(xiàn)。這種現(xiàn)象可掩蓋潛在的污染。

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