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認識基于微流控技術的數字PCR

聚合酶鏈式反應(PCR)是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制,PCR的最大特點是能將微量的DNA大幅增加。1983年美國Mullis首先提出聚合酶鏈式反應設想,1985年由其發明了聚合酶鏈反應,即簡易DNA擴增法,意味著PCR技術的真正誕生。


PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合,再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基于聚合酶制造的PCR儀實際就是一個溫控設備,能在變性溫度,復性溫度,延伸溫度之間很好地進行控制。


數字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一種核酸分子絕對定量技術。相較于傳統的PCR,數字PCR可讓你能夠直接數出DNA分子的個數,是對起始樣品的絕對定量。


20 世紀末,Vogelstein 等提出數字PCR( digitalPCR,dPCR) 的概念,通過將一個樣本分成幾十到幾萬份,分配到不同的反應單元,每個單元至多包含一個拷貝的目標分子( DNA 模板) ,在每個反應單元中分別對目標分子進行PCR 擴增,擴增結束后對各個反應單元的熒光信號進行統計學分析。


數字PCR是一種核酸分子絕對定量技術。當前核酸分子的定量有三種方法:光度法基于核酸分子的吸光度來定量;實時熒光定量PCR(Real Time PCR)基于Ct值,Ct值就是指可以檢測到熒光值對應的循環數;數字PCR是最新的定量技術,基于單分子PCR方法來進行計數的核酸定量,是一種絕對定量的方法。主要采用當前分析化學熱門研究領域的微流控或微滴化方法,將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或微滴中,每個反應器的核酸模板數少于或者等于1個。這樣經過PCR循環之后,有一個核酸分子模板的反應器就會給出熒光信號,沒有模板的反應器就沒有熒光信號。根據相對比例和反應器的體積,就可以推算出原始溶液的核酸濃度。


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標簽:   微流控 數字PCR 微反應器 微液滴
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